Come Progettare Primer per la PCR: Guida Completa

I primer oligonucleotidici sono essenziali per eseguire una reazione di PCR. Devono essere progettati in modo da essere complementari alla regione del DNA modello. Vengono sintetizzati chimicamente unendo nucleotidi uno alla volta, bloccando e sbloccando selettivamente i gruppi reattivi durante il processo. La caratteristica principale dei primer è che devono corrispondere alle sequenze della molecola modello, cioè essere complementari al filamento modello. Tuttavia, non è necessario che corrispondano perfettamente al filamento modello: ciò che conta è che l’estremità 3’ del primer sia completamente complementare al DNA modello, in modo che la reazione di allungamento possa procedere. Di solito, all’estremità 3’ si usa una guanina o una citosina, mentre l’estremità 5’ del primer presenta spesso una sequenza di più nucleotidi. Inoltre, le estremità 3’ dei primer ibridati devono essere orientate l’una verso l’altra.

Capitoli:
0:00 Introduzione alla Progettazione dei Primer
0:57 Lunghezza del Primer
1:26 Temperatura di Annealing e di Scioglimento
2:27 Composizione dei Nucleotidi nel Primer
3:20 Struttura Secondaria
4:04 Hai Giusto Progettato un Primer!

Crediti
Con: Jennifer Tsang
Riprese: Jennifer Tsang
Scritto da: Jennifer Tsang & Quintin Marcelino
Regia, Animazione e Montaggio: Quintin Marcelino